【摘要】目的：明确RIP3/MLKL/TRPM7坏死性凋亡通路在DMED大鼠阴茎组织中的作用，探究伊木萨克片对DMED大鼠阴茎组织中RIP3/MLKL/TRPM7坏死性凋亡通路的影响及其改善DMED大鼠阴茎勃起功能的机制。方法：（1）150只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组（N组，n=20）和糖尿病造模组（DM组，n=130）。DM组大鼠连续2d给予2次腹腔注射链脲佐菌素（45mg/kg）制备DM大鼠模型，3d后，筛选出123只DM大鼠。所有大鼠自由饮水摄食，动态观测大鼠的生物学体征、随机血糖、阴茎勃起能力和性行为的变化，8w后，筛选出115只DMED大鼠。（2）N组大鼠随机选取10只继续进行实验，115只DMED大鼠随机选取60只分为DMED模型组（DMED组，n=10）、RIP3特异性抑制剂GSK872干预组（RIP3i组，n=20）、伊木萨克片干预组（Y组，n=10）以及GSK872与伊木萨克片联合干预组（RIP3i+Y组，n=20）。药物连续干预2w。所有大鼠自由饮水摄食，动态观测大鼠的生物学体征、随机血糖、阴茎勃起能力和性行为的变化，2w后，检测大鼠糖化血红蛋白的含量，检测大鼠MaxICP/MAP。（3）HE染色观察大鼠阴茎组织形态学变化，WB、IHC检测大鼠阴茎组织中eNOS和ET-1的水平。（4）Masson染色观察大鼠阴茎海绵体平滑肌纤维化程度，WB、IHC检测大鼠阴茎组织中α-SMA和CollagenⅠ的水平。（5）WB、IHC检测大鼠阴茎组织中TNF-α和IL-6的水平。（6）RT-qPCR、WB、IHC、IF检测大鼠阴茎组织中p-RIP3、RIP3、p-MLKL、MLKL和TRPM7的水平，检测大鼠阴茎组织中Ca2+的浓度，PI染色观察大鼠阴茎组织中细胞膜破裂细胞的数量，dIF检测大鼠阴茎组织中RIP3/MLKL和MLKL/TRPM7免疫荧光共定位的程度。结果：（1）造模前，与N组相比，DM组大鼠生物学体征、随机血糖、阴茎勃起能力和性行为差异无统计学意义（P＞0.05）。造模第2w、第4w、第6w及第8w，与N组相比，DM组大鼠生物学体征显著变化，随机血糖升高，阴茎勃起能力减退，性功能减退（P＜0.05）。（2）干预前，与N组相比，DMED组大鼠生物学体征显著变化，随机血糖升高，阴茎勃起能力减退，性功能减退（P＜0.05）；与DMED组相比，RIP3i组、Y组和RIP3i+Y组大鼠生物学体征、随机血糖、阴茎勃起能力和性行为差异无统计学意义（P＞0.05）；与RIP3i组和Y组相比，RIP3i+Y组大鼠生物学体征、随机血糖、阴茎勃起能力和性行为差异无统计学意义（P＞0.05）。干预第1w及第2w，与N组相比，DMED组大鼠生物学体征显著变化，随机血糖升高，阴茎勃起能力减退，性功能减退（P＜0.05）；与DMED组相比，RIP3i组、Y组和RIP3i+Y组大鼠生物学体征和随机血糖差异无统计学意义（P＞0.05），但阴茎勃起能力提升，性功能提升（P＜0.05）；与RIP3i组和Y组相比，RIP3i+Y组大鼠生物学体征和随机血糖差异无统计学意义（P＞0.05），但阴茎勃起能力提升，性功能提升（P＜0.05）。干预后，与N组相比，DMED组大鼠糖化学血红蛋白含量升高，MaxICP/MAP降低（P＜0.05）；与DMED组相比，RIP3i组、Y组和RIP3i+Y组大鼠糖化血红蛋白含量差异无统计学意义（P＞0.05），但MaxICP/MAP升高（P＜0.05）；与RIP3i组和Y组相比，RIP3i+Y组大鼠糖化血红蛋白含量差异无统计学意义（P＞0.05），但MaxICP/MAP升高（P＜0.05）。（3）与N组相比，DMED组大鼠阴茎组织中海绵体窦腔增大并出现结构损伤，eNOS的水平降低，ET-1的水平升高（P＜0.05）；与DMED组相比，RIP3i组、Y组和RIP3i+Y组大鼠阴茎组织中海绵体窦腔有所减小且结构有所改善，eNOS的水平升高，ET-1的水平降低（P＜0.05）；与RIP3i组和Y组相比，RIP3i+Y组大鼠阴茎组织中海绵体窦腔有所减小且结构有所改善，eNOS的水平升高，ET-1的水平降低（P＜0.05）。（4）与N组相比，DMED组大鼠阴茎组织中平滑肌/胶原纤维降低，α-SMA的水平降低，CollagenⅠ的水平升高（P＜0.05）；与DMED组相比，RIP3i组、Y组和RIP3i+Y组大鼠阴茎组织中平滑肌/胶原纤维升高，α-SMA的水平升高，CollagenⅠ的水平降低（P＜0.05）；与RIP3i组和Y组相比，RIP3i+Y组大鼠阴茎组织中平滑肌/胶原纤维升高，α-SMA的水平升高，CollagenⅠ的水平降低（P＜0.05）。（5）与N组相比，DMED组大鼠阴茎组织中TNF-α和IL-6的水平升高（P＜0.05）；与DMED组相比，RIP3i组、Y组和RIP3i+Y组大鼠阴茎组织中TNF-α和IL-6的水平降低（P＜0.05）；与RIP3i组和Y组相比，RIP3i+Y组大鼠阴茎组织中TNF-α和IL-6的水平降低（P＜0.05）。（6）与N组相比，DMED组大鼠阴茎组织中p-RIP3、RIP3、p-MLKL、MLKL和TRPM7的水平升高，Ca2+的浓度升高，细胞膜破裂细胞的数量增加（P＜0.05）；与DMED组相比，RIP3i组、Y组和RIP3i+Y组大鼠阴茎组织中p-RIP3、RIP3、p-MLKL、MLKL和TRPM7的水平降低，Ca2+的浓度降低，细胞膜破裂细胞的数量减少（P＜0.05）；与RIP3i组和Y组相比，RIP3i+Y组大鼠阴茎组织中p-RIP3、RIP3、p-MLKL、MLKL和TRPM7的水平降低，Ca2+的浓度降低，细胞膜破裂细胞的数量减少（P＜0.05）。大鼠阴茎组织中RIP3与MLKL存在一定程度的共定位，MLKL与TRPM7存在一定程度的共定位。结论：（1）DM可通过激活RIP3/MLKL/TRPM7坏死性凋亡通路来加重阴茎海绵体内皮损伤、阴茎海绵体平滑肌纤维化和阴茎组织中的炎症进而使大鼠产生ED。（2）伊木萨克片并非通过降低血糖，而是通过抑制RIP3/MLKL/TRPM7坏死性凋亡通路来减轻阴茎海绵体内皮损伤、阴茎海绵体平滑肌纤维化和阴茎组织中的炎症进而改善DMED大鼠的阴茎勃起功能，且与GSK872联合干预效果更佳。

【关键词】糖尿病性勃起功能障碍RIP3/MLKL/TRPM7通路链脲佐菌素坏死性凋亡伊木萨克片

【语种】中文

【分类号】R697.14（泌尿科学（泌尿生殖系疾病））